簡要描述:人淋巴毒素α(LTA)ELISA Kit 試劑盒試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被活性氧抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品活性
實(shí)驗(yàn)原理
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELIAS)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等有點(diǎn)。
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測含NAN3的樣品,因NAN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作程序
準(zhǔn)備試劑、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品→→加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘→→洗板5次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘→→洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘→→加入終止液→→15分鐘內(nèi)讀OD值→→計(jì)算
注意事項(xiàng)
1.人淋巴毒素從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被開封后如未使用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各布加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排加樣。
4.請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高)(樣品OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(N倍)后再測定計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×N×5)。
5.封板膜只限一次使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.人淋巴毒素α(LTA)ELISAKit試劑不同批號(hào)組分不得混用。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃;
2.有效期:6個(gè)月。
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